Zestaw do pobierania próbek płynów ustnych płynu ustnego

Jedną z tych technik jest pobieranie i wykorzystywanie płynów ustnych (śliny) jako próbki do diagnozy u świń. Ta technika została już eksperymentalnie zwalidowana pod kątem PRRSV, PCV2 i grypy i jest rutynowo stosowana na farmach w USA do wykrywania PRRSV i grypy na poziomie populacji. Technika ta polega na zawieszeniu bawełnianej liny w kojcu, tak aby świnie gryzły ją, pozostawiając na niej ślinę (Prickett i in., 2008).

Zestaw zawiera następujące elementy:

100% bawełniany sznur (nie poddany działaniu produktów chemicznych), plastikowa torba (typ Zipplog ®), sterylna plastikowa rurka ze stożkową lub zaokrągloną podstawą o pojemności wystarczającej do objętości próbki oraz para rękawiczek lateksowych.

1. Kluczowe punkty:

• Liczba sznurków potrzebnych, aby próbka była reprezentatywna, będzie zależeć od wielkości populacji, rozmieszczenia budynków i wielkości kojców (uznaje się, że w jednopiętrowych budynkach z 1000 zwierząt wystarczy 6 sznurków, aby wykryć 10% rozpowszechnienie z 95% poziomem ufności (Detmer i wsp., 2010).
• Średnica sznura i wysokość, na której należy ją umieścić, będzie zależeć od wieku zwierząt, ale musi być łatwo dostępna dla całej grupy.
• Okres 30 minut wystarczy, aby 75% zwierząt zetknęło się ze sznurem w kojcu z 25-30 świniami, liczba ta wzrasta do 90%, jeśli powiesimy dwa sznury na ten sam czas.
• Przed odzyskaniem sznura sprawdź, czy jest przesiąknięty śliną (pomoże to zdecydować, czy okres był wystarczający).

2. Pobieranie próbek:

Mokry obszar sznura jest odcinany i umieszczany w czystej plastikowej torbie. Ślinę (płyn ustny) uzyskuje się tak, jak pokazano na zdjęciach, a próbkę dekantuje się do sterylnych probówek.

Ostrzeżenia: pozyskanie śliny należy przeprowadzić jak najszybciej po zebraniu sznurków i należy zachować ostrożność, aby jak najmniej dotykać ich bezpośrednio rękami, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego. Szybko schłodzić próbki.

Próbki płynów ustnych

3. Konserwacja:

- Brud w próbkach (artefakty) może zakłócać diagnozę. Z tego powodu ślinę należy odwirować (1000-2000 obr/min/30 min) lub pozwolić, aby cząsteczki brudu obecne w próbce osiadły na dnie probówki przynajmniej przez 60 min. Zbadaj lub zachowaj supernatant.

- Próbki należy przechowywać w lodówce (4-10°C). W temperaturze 4°C można je przechowywać do 12 dni, co nie pociąga za sobą zmian w wykrywaniu PRRSV metodą PCR. Aby zakonserwować próbki, należy je zamrozić (-20°C lub -80°C).

4. Testowanie:

Wykrywanie patogenów wirusowych i bakteryjnych odbywa się poprzez reakcję łańcuchową polimerazy (PCR). Wirusowe RNA PRRS i grypy można wykryć w ślinie 24 godziny po zakażeniu. Wykrywanie przeciwciał przeciwko PRRSV i PCV2 można przeprowadzić za pomocą testu ELISA i jest to alternatywa w stosunku do PCR w celu obniżenia kosztów diagnozy. Niemniej jednak izolacja wirusa PRRSV i PCV2 nie jest jeszcze wykonywana, a w przypadku grypy odsetek izolacji z płynów ustnych dodatnich pod względem PCR wynosi 51%.

5. Zalety i ograniczenia techniki:

Monitorowanie populacji za pomocą płynów ustnych może skutkować niższymi kosztami diagnostycznymi, podczas gdy liczba świń, od których pobrana została próbka wzrasta, a w przyszłości wzrośnie również liczba patogenów, które można wykryć.

Pobieranie próbek nie wymaga wyspecjalizowanego personelu. Ciekawość świń ułatwia pobieranie próbek, ponieważ wchodzą one w interakcje i bawią się liną, podczas gdy nakładają na nią ślinę.

Dzięki próbkom płynów ustnych uzyskujemy wyższą reprezentację populacji, a czułość wykrywania infekcji o niskiej częstości występowania (≤ 10%) jest równa lub niższa niż w przypadku tradycyjnych 30 pojedynczych próbek.

Próbki śliny są reprezentatywne na poziomie populacji, ale nigdy nie mogą zastąpić pojedynczych próbek do izolacji drobnoustrojów.

W celu uniknięcia wyników fałszywie ujemnych, bardzo ważne jest unikanie łączenia próbek i sprawdzanie, czy próbki są przetwarzane w laboratorium, które jest zaznajomione z technikami diagnostyki próbek śliny.

Aby uzyskać więcej informacji, sprawdź:

http://vetmed.iastate.edu/vdpam/disease-topics/oral-fluids
http://www.vdl.umn.edu/submission-guidelines/oral-fluids/index.htm